细胞工程之植物细胞工程·上

2.细胞工程：

(1).生物体生长发育过程中细胞不表现全能性的原因是在特定的时间和空间条件下，细胞中的基因会选择性地表达（从而形成生物体的不同组织和器官）。（如芽原基的细胞只能发育为芽，叶原基的细胞只能发育为叶等）

(2).植物组织培养：将离体的植物器官、组织或细胞等，培养在人工配置的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。

(3).植物组织培养基本步骤：

<1>.接种外植体：将消过毒的外植体置于无菌培养皿中，用无菌滤纸吸干表面水分，再用解刨刀将其切成0.5～1cm长的小段。

<2>.诱导脱分化：在酒精灯火焰旁将外植体的1/3～1/2插入诱导愈伤组织的培养基中（形态学上端在上，不能倒插），用封口膜或瓶盖封盖瓶口.将接种后的锥形瓶或植物组织培养瓶置于18～22℃的培养箱中培养（维持黑暗环境），定期观察和记录愈伤组织的生长情况。

<3>.诱导再分化：培养15～20天后，将生长良好的愈伤组织转接到诱导生芽的培养基中（不需光照），生芽后再转接到诱导生根的培养基中（需要光照）。生根后进一步诱导形成试管苗。

<4>.移栽成活：先打开封口膜或瓶盖让试管苗在培养箱内生长几日，再用流水清洗掉根部的培养基。将幼苗移植到消毒的蛭石或珍珠岩等环境中，长壮后再移栽入土。

(4).植物组织培养最常用的是MC培养基，配置MC培养基前需要根据植物对各物质的需求量进行计算，其pH约为5.8。

(5).MC培养基母液中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍。

(6).MC培养基中可添加蔗糖，目的是提供营养核调节渗透压。

(7).除了用添加激素的培养基，还可用生长素溶液诱导幼芽生根：

<1>.浸泡法：低浓度溶液长时间浸泡幼芽。

<2>.沾蘸法：幼芽蘸取少量高浓度溶液短时间处理。

(8).按不同顺序使用生长素和细胞分裂素得到的结果：

<1>.先用生长素后用细胞分裂素：有利于细胞分裂，但细胞不分化。

<2>.先用细胞分裂素后用生长素：细胞既分裂又分化。

<3>.同时使用：细胞分化频率提高。

(9).同时使用生长素和细胞分裂素时其用量比例对植物发育方向的影响：

<1>.生长素/细胞分裂素的比值高：有利于根的分化，抑制芽的形成。

<2>.生长素/细胞分裂素的比值低：有利于芽的分化，抑制根的形成。

<3>.生长素/细胞分裂素的比值适中：促进愈伤组织的形成。