细胞工程之动物细胞工程（四）

(89).动物细胞融合融合时，一般将多个细胞混合处理，用免疫法筛选。

(90).诱导动物细胞融合常用PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法。

(91).灭活病毒诱导法的原理是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。

(92).灭活：用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但不破坏它们的抗原结构。

(93).通过动物细胞融合技术发展起来的杂交瘤技术为制造单克隆抗体开辟了新途径。

(94).制备单克隆抗体的技术是动物细胞融合和动物细胞培养。

(95).杂交瘤细胞的特点：既能迅速大量增殖，又能产生抗体。

(96).制备单克隆抗体的基本步骤：

<1>.用特定的抗原对小鼠进行免疫（将抗原注射入小鼠体内），从其脾脏中提取能产生特异性抗体的B淋巴细胞（多种）。

<2>.用动物细胞融合技术诱导众多B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合。

<3>.用特定的选择培养基（HAT培养基）进行筛选，此时未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只留下融合的杂交瘤细胞（不止一种）。

<4>.对杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。

<5>.大规模培养抗体检测呈阳性（分泌的抗体能与特定抗原结合）的杂交瘤细胞。

(97).大规模培养杂交瘤细胞又分为体内培养和体外培养。

(98).培养体系中出现多种的细胞的原因：细胞融合具有随机性，且融合率不达100%。

(99).动物细胞培养、植物组织培养和单克隆抗体都属于克隆。

(100).体内培养：将筛选出来的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内增殖，从小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体。

(101).体内培养的优点：

<1>.不需要配置特定的培养基。

<2>.不需要严格控制环境。

(102).体外培养：用动物细胞培养技术在体外条件下培养杂交瘤细胞，从细胞培养液中获取所需单克隆抗体。

(103).单克隆抗体的化学本质是球蛋白，在治疗上具有特异性强、灵敏度高、可大量制备的特点。

(104).若要培养抗癌细胞的特异性抗体，注入小鼠体内的抗原通常是该种癌细胞细胞膜表面的蛋白质。

(105).生产的单克隆抗体不能直接作用于人体，其对人体而言是抗原，存在免疫排斥。

(106).在单克隆抗体问世前，人们常向动物体内反复注射某种抗原，然后从动物血清中分离所需抗体，这种方法获得的抗体产量低、纯度低且特异性差。

(107).血清抗体特异性差的原因；血清中多种抗体混杂在一起，识别多种抗原。